بررسی مولکولی فعالیت پروتئولیتیکی پروتئین ۳c در پاراکو ویروس انسانی تیپ یک

زمینه و هدف: پاراکوویروس های انسانی، جزء خانواده پیکورنا ویروس ها می باشند که از نظر کلینیکی حائز اهمیت هستند. اخیراً بررسی توالی ژنوم پاراکوویروس تیپ یک نشان داده است که این ویروس، از پیکورنا ویروس های دیگر متفاوت بوده و فاقد موتیفی است که در فعالیت پروتئازی 2a دخالت دارد. هدف از انجام این مطالعه، بررسی فعالیت پروتئولیتیکی پروتئین 3c در پاراکو ویروس انسانی تیپ یک می باشد. روش بررسی: این مطالعه از نوع بنیادی کاربردی می باشد. ناحیه کد کننده پروتئین 3c از cdna(complementary dna) تهیه شده از ژنوم پاراکو ویروس انسانی تیپ یک، با آنزیم لیگاز در پلاسمید pubs(expression plasmid vector) وارد شد و پلاسمید نوترکیب pfg3(plasmid farideh ghazi) تهیه گردید. پس از انتقال پلاسمید و تکثیر آن در باکتری e.coli mc10.22، به طریق استخراج با فنل، dna جدا شد و سپس در سیستم پروکاریوتی(e.coli bl21) و روش درون لوله ای(in vitro)، تحت پروموتور t7 بیان گردید. نتایج با sds-page(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamid gel electrophoresis) بررسی شد. یافته ها: با بررسی محصول بیان پلاسمید نوترکیب فاقد ژن 3c در هر دو سیستم پروکاریوتی و in vitro، فقط یک باند بزرگ در حدود 90 کیلو دالتون مشاهده گردید. در صورتی که وقتی محصول بیان پلاسمید نوترکیب حاوی 3c در هر دو سیستم توسط پلی آکریل آمید ژل بررسی شد، بجای یک باند بزرگ، چندین باند کوچک مشاهده شد که دلالت بر خاصیت پروتئازی پروتئین 3c می کند. در ضمن وقتی آنتی پروتئاز به محصول پلاسمید حاوی ژن 3c اضافه گردید، نتیجه، مشابه محصولات حاصل از بیان پلاسمید فاقد ژن 3c بود. نتیجه گیری: نتایج نشان داد که پاراکوویروس های انسانی تیپ یک، از نظر فعالیت پروتئولیتیکی، متفاوت از دیگر پیکورنا ویروس ها می باشند و در این ویروس ها، فقط پروتئین 3c دارای خاصیت پروتئازی بوده و کلیه کلیواژهای پلی پروتئین اولیه ویروس توسط این پروتئاز انجام می شود.